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Detección genómica y expresión de péptidos antimicrobianos (α- y β-defensinas) en mucosa intestinal de crías de alpaca (Vicugna pacos)

Autor: J. More B., A. Manchego S., N. Sandoval C., M. Ramírez V., D. Pezo C., K. Lam Chiok C. y H. Rivera G. Revista de Investigaciones Veterinarias del Perú 2011; 22 (4): 324-335
Resumen: El objetivo del presente estudio fue determinar la presencia genómica de α - y β - defensinas (Defa 8 y β -def alp) y sus niveles de expresión como ARN mensajeros, en muestras de mucosa intestinal de crías alpaca. Se colectaron muestras de yeyuno y sangre de 30 animales de 0 a 45 días de edad. Se extrajo el ADN genómico y los ARN mensajeros para el análisis por PCR y RT-PCR tiempo real, respectivamente. La prueba de PCR convencional determinó que todas las muestras amplificaron un segmento genómico de entre 800 y 900 pb correspondiente a una Defa 8, y el 90% (27/30) de las muestras amplificó un segmento esperado de 300 a 350 pb para β -def alp y dos bandas adicionales de 800 a 900 pb, evidenciados en la electroforesis en gel de agarosa. La detección de ARN mensajeros por RT-PCR tiempo real se realizó en base al análisis de las curvas de amplificación (Ct) y curvas de disociación (Tm) de los productos amplificados. Las Cts de los amplificados de Defa 8 estuvieron entre 25.1 y 39.5 ciclos, con un promedio de 36.4 ± 1.9, y las Tm entre 79.1 y 85.7 ºC. Las Cts de los amplificados de β -def alp estuvieron entre 22.7 y 36.8 ciclos, con un promedio de 32.4 ± 3.3, y las Tm tuvieron un rango de 71 a 81.9 ºC. Los niveles de expresión se determinaron por  cuantificación relativa en base al método de Ct comparativo. Los resultados mostraron niveles crecientes de Defa 8 y
β - def alp hasta la 3ª semana, disminuyendo entre la 4ª y 6ª semana. Los resultados demuestran la presencia genómica y expresión de α
- y β -defensinas en el yeyuno de las crías de alpaca menores de 45 días de edad.

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